2021年6月4日，熙华药业及岛津（上海）实验器材有限公司（SGLC）联合推出了基于Shim-pack Scepter C8有机杂化硅胶柱的Triton X-100分析方法。

一、前言

Triton X-100是一种非离子型表面活性剂，其化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚（图1）。作为常用的灭活剂和裂解剂，该试剂大量应用于生物制品，尤其是疫苗、基因-细胞治疗产品的生产中。由于Triton X-100本身具有一定毒性，因此需要在终产品中对其残留量进行检测。中国药典2020版三部对一些生物制品中Triton X-100的残留量做了明确规定，要求小于15.0 μg/mL，但尚未收载统一的检测方法。

图1. Triton X-100结构式示意图

目前Triton X-100的测定方法主要有：紫外分光光度法、荧光分光光度法、化学发光法和液相色谱法等，其中紫外、荧光、化学发光法受基质干扰严重，专属性差。液相色谱法有较好的分离能力，但由于Triton X-100本身为一系列聚合度不同的高分子混合物，在液相色谱中表现为一个宽峰或簇峰，导致方法灵敏度低。同时，生物样品本身结构和组分复杂，易与Triton X-100发生吸附，导致方法回收率不佳。

鉴于上述问题，我们联合岛津（上海）实验器材有限公司推出了基于Shim-pack Scepter C8有机杂化硅胶柱的Triton X-100分析方法。该方法具有专属性好、灵敏度高、重复性好、准确度优异等优点，可以用于生物制品中Triton X-100残留的检测放行。

二、实验部分

2.1 试剂

乙腈：HPLC级；超纯水。

2.2 仪器及条件

高效液相色谱仪：配备VWD检测器

流动相A：90%乙腈

流动相B：10%乙腈

图2. Triton X-100加标溶液色谱图

三、结果与讨论

3.1 重复性

图3结果表明本方法重现性和精密度良好。

图3. Triton X-100对照溶液图

3.2 灵敏度

如图4、图5所示，通过线性外推，可知该方法的检测限和定量限约为0.05 ppm和0.15 ppm。

图4. 0.2 ppm浓度下Triton X-100的色谱图

图5. 0.4 ppm浓度下Triton X-100的色谱图

3.3 线性

如图6所示，Triton X-100线性拟合结果R² = 1.00，结果优异。

图6. 0.2~3.2 ppm范围内Triton X-100的标准曲线图

3.4 准确度

在生物制剂中分别加入不同浓度的Triton X-100进行加标回收率实验，回收率在92.3%-98.7%之间（图7）。

图7. 1.6 ppm水平下Triton X-100的加标回收率结果

四、结论

综上所述，本方法的专属性、准确度和精密度良好、工作曲线相关性优异、灵敏度高，可以作为生物制剂中Triton X-100残留测定的优选解决方案。

作者：冯中慧，上海熙华药业有限公司，上海工程技术大学学士，2020年6月加入熙华药业，从事分析方法开发及验证工作。