熙华药业联合岛津(上海)实验器材有限公司推出Triton X-100的高灵敏度检测方法

一、前言


Triton X-100是一种非离子型表面活性剂,其化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚(图1)。作为常用的灭活剂和裂解剂,该试剂大量应用于生物制品,尤其是疫苗、基因-细胞治疗产品的生产中。由于Triton X-100本身具有一定毒性,因此需要在终产品中对其残留量进行检测。中国药典2020版三部对一些生物制品中Triton X-100的残留量做了明确规定,要求小于15.0 μg/mL,但尚未收载统一的检测方法。


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图1. Triton X-100结构式示意图



目前Triton X-100的测定方法主要有:紫外分光光度法、荧光分光光度法、化学发光法和液相色谱法等,其中紫外、荧光、化学发光法受基质干扰严重,专属性差。液相色谱法有较好的分离能力,但由于Triton X-100本身为一系列聚合度不同的高分子混合物,在液相色谱中表现为一个宽峰或簇峰,导致方法灵敏度低。同时,生物样品本身结构和组分复杂,易与Triton X-100发生吸附,导致方法回收率不佳。


鉴于上述问题,我们联合岛津(上海)实验器材有限公司推出了基于Shim-pack Scepter C8有机杂化硅胶柱的Triton X-100分析方法。该方法具有专属性好、灵敏度高、重复性好、准确度优异等优点,可以用于生物制品中Triton X-100残留的检测放行。



二、实验部分


2.1 试剂

    乙腈:HPLC级;超纯水。


2.2 仪器及条件

  高效液相色谱仪:配备VWD检测器

  流动相A:90%乙腈

  流动相B:10%乙腈


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图2. Triton X-100加标溶液色谱图



三、结果与讨论


3.1 重复性

图3结果表明本方法重现性和精密度良好。


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图3. Triton X-100对照溶液图


3.2 灵敏度

如图4、图5所示,通过线性外推,可知该方法的检测限和定量限约为0.05 ppm和0.15 ppm。


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图4. 0.2 ppm浓度下Triton X-100的色谱图


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图5. 0.4 ppm浓度下Triton X-100的色谱图


3.3 线性

如图6所示,Triton X-100线性拟合结果R² = 1.00,结果优异。


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图6. 0.2~3.2 ppm范围内Triton X-100的标准曲线图


3.4 准确度

在生物制剂中分别加入不同浓度的Triton X-100进行加标回收率实验,回收率在92.3%-98.7%之间(图7)。


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图7. 1.6 ppm水平下Triton X-100的加标回收率结果


四、结论


综上所述,本方法的专属性、准确度和精密度良好、工作曲线相关性优异、灵敏度高,可以作为生物制剂中Triton X-100残留测定的优选解决方案。



作者:冯中慧,上海熙华药业有限公司,上海工程技术大学学士,2020年6月加入熙华药业,从事分析方法开发及验证工作。



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